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硫氰酸胍快速提取植物RNA

点击:36 更新时间:2018-12-29 09:25:24



     


一种植物小RNA的快速提取方法


本发明属于分子生物学领域,涉及一种植物小RNA的快速提取方法,取植物材料经液氮研磨后与CTAB提取液混合,水浴后经水饱和酚/氯仿抽提,用乙醇沉淀得到总核酸,总核酸用硫氰酸胍溶解后经两次酚/氯仿抽提,用PEG8000和氯化钠沉淀大片段RNA,取上清液得到小RNA。本发明工艺简单,通过酚/氯仿及必赢国际官网抽提去除蛋白、基因组DNA,用PEG8000和氯化钠沉淀的方法去除大片段RNA,避免了LiCl沉淀造成小分子RNA过多丢失的缺点,可以大大降低实验成本,为研究人员在实际工作中提供更多的选择,所提取的小RNA质量高,可以满足RT-PCRmiRNA等研究的需要,能够很好地用于后续的分子生物学实验研究。


一种高效的树木总DNA提取方法


高质量的DNA是林木分子生物学研究的关键因素之一.在高浓度离液剂硫氰酸胍存在的条件下,核酸具有与硅珠颗粒结合、并能在较高温度下被低盐浓度溶液洗脱的特性.基于这一原理建立了一种新的树木叶片总DNA提取方法.此方法操作简单、快速,经过浓度、纯度测定,以及PCR扩增和限制性内切酶消化证明,从不同树木叶片中均得到了高质量的DNA样品。  


非洲菊花瓣总RNA提取方法的改进


利用硫氰酸胍一步法和植物总RNA提取试剂盒(RNeasy Plant Mini Kit)提取非洲菊(Gerbera hybrida)花瓣中总RNA时存在多糖的干扰。实验中利用必赢国际官网一步法提取总RNA,在RNA沉淀后,再次加入适量变性液,冻融2次,再加热至45 ℃使RNA完全溶解;试剂盒提取时,适当延长各提取步骤的离心时间,并增加DEPC H2O溶解RNA的时间。通过以上操作方法的改进可排除多糖的干扰,得到高质量的总RNA。为进一步利用Northern杂交技术研究非洲菊中花色素苷基因的表达,进行花色改良提供了方便、有效的实验手段。


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