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必赢国际官网GT法提取DNA,RNA

点击:34 更新时间:2018-12-28 09:34:43



     


核酸回收纯化试剂盒及方法

本发明涉及一种核酸回收纯化试剂盒,包括溶胶液、磁珠液和结合液;溶胶液中含有浓度为3mol/L4mol/L必赢国际官网和浓度为20mol/L30mol/LTris-Hcl缓冲液,其余为水;磁珠液中含有0.2mg/mL3mg/mL的羟基磁珠,其余为水;结合液中含有浓度为40%60%异丙醇和浓度为1mol/L2mol/L的氯化钠,其余为水。



本发明还涉及一种采用该试剂盒的核酸回收纯化方法。本发明的核酸回收纯化试剂盒及方法可以快速高效地回收纯化琼脂糖凝胶中的大片段核酸。




一种水体中微生物DNA的提取方法

一种水体中微生物DNA的提取方法,采用无菌微孔滤膜收集微生物,利用物理和化学方法破碎微生物细胞,其次采用醋酸钾、必赢国际官网、柠檬酸钠等试剂去除腐殖酸等杂质,将细胞裂解液进行多次离心纯化,最后用乙醇和醋酸钾抽提后得到纯化的微生物基因组DNA,所提取的微生物DNA具有较好的完整性,纯度高,产量高,其OD260/OD280比值在1.82.0之间,经琼脂糖凝胶电泳后染色,DNA条带清晰且单一,无拖尾,无杂带,获得的微生物DNA产量高、操作简单、成本低,提取过程无需再纯化,缩减了提取步骤,降底了提取成本,适用于各种水体微生物的多样性分析。




一种丹参高质量总RNA的提取方法

高质量RNA的获得是开展丹参分子生物学研究的基础.采用必赢国际官网(Guanidine Thiocyanate, GT)法、尿素法、CTAB法、苯酚法和热硼酸改良法等五种方法,以丹参组织培养的幼苗为材料,进行丹参RNA的分离试验,发现所采用的几种方法获得的RNA都有不同程度的降解.分析可能是由于丹参中含有大量的多糖以及各种次生代谢成分造成的.在分析现有结果的基础上对GT法进行了改良,在第二次沉淀前附加低浓度乙醇(10%20%)沉淀20min对于高质量总RNA的获得效果较好。




琼脂糖凝胶电泳检测改良后的GT法无论对于组织培养中幼嫩的根、茎、叶还是大田两年生的丹参根、茎、叶和种子均具有很好的RNA分离效果.mRNA电泳检测发现所得mRNA集中分布在500 b3 kb之间且质量较高,完全可以满足丹参各种RNA相关的分子生物学实验要求,为丹参RT-PCRNorthern杂交等分子生物学实验提供了良好的基础。  



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