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硫氰酸胍作为裂解消化液的可行性

点击:30 更新时间:2018-10-26 09:03:15


     

探讨以硫氰酸胍作为组织细胞裂解液的可行性,并建立基因组DNA快速提取方法。利用硫氰酸胍等作为裂解消化液,分别从组织、细胞和全血中提取基因组DNA。采用紫外分光光度仪检测基因组DNA含量及纯度,琼脂糖凝胶电泳检测基因组DNA的完整性,以提取的基因组DNA作为模板进行PCR扩增GAPDH基因,并用该方法检测凋亡细胞DNA ladder

结果基因组DNA提取时间短(耗时3050 min),基因组DNA含量85μg/mg(组织),52μg/1×107细胞,27μg/ml(血液)A260nm/A280nm比值在1.81.9之间,电泳显示基因组DNA完整性好,无蛋白质和RNA污染,基因组DNA长度大于48kb.PCR扩增出306bp GAPDH目的基因,肿瘤细胞经抗癌基因诱导凋亡后琼脂糖凝胶电泳可见180200bp典型的凋亡带。

结论:硫氰酸胍可作为基因组DNA提取裂解消化液,该方法具有简便、快捷、稳定性好等特点。


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